28°C-д 25 хоногийн статик инкубацийн дараа *Pleurotus ostreatus* NRC620-ийн лакказ нь мөөгөнцрийн өсгөврийн орчинд хамгийн өндөр идэвхжил үзүүлсэн. Энэ ферментийн оновчтой рН ба температурын утга нь тус тус 3.0 ба 70°C байв. 40°C ба 50°C-д 2 цагийн инкубацийн дараа ферментийн идэвхжил тус тус 68.33% ба 59.61% хэвээр байв. Цитрат-фосфатын буферт (рН 7.0) 2 цагийн инкубацийн дараа ферментийн идэвхжил 100% хэвээр байв. 10 мМ MgSO₄ ба CuSO₄ нэмэхэд ферментийн идэвхжил ойролцоогоор 21% ба 35%-иар тус тус нэмэгдсэн бол NaCl, MnCl₂, KCl, CaCl₂ нь ферментийн идэвхжилийг дарангуйлсан. ABTS-ийг субстрат болгон ашигласан *Pleurotus ostreatus* NRC 620 лактазын кинетик параметрүүд (Km ба Vmax) нь тус тус 1.99 мМ ба 16,217 μmol min−1 L−1 байв. Алимны шүүсний дээжийг ферментийн аргаар боловсруулснаар рН болон зуурамтгай чанар мэдэгдэхүйц буурсан бөгөөд энэ бууралт нь хадгалах хугацаа нэмэгдэхтэй холбоотой байв. Лактазын боловсруулалт нь алимны шүүсний нийт фенолын агууламжийг бага зэрэг бууруулсан боловч антиоксидант идэвхжил буураагүй.
Сүүлийн жилүүдэд судлаачид хүнсний үйлдвэрлэлд ногоон биотехнологийг хэрэглэхэд анхаарлаа хандуулж байна. Лакказа нь хүнсний үйлдвэрлэлийн хамгийн ашигтай ферментүүдийн нэг бөгөөд жүүс боловсруулах, нарийн боов хийх, дарс тогтворжуулах, хүнсний бүтээгдэхүүний органолептик чанарыг сайжруулах зэрэг салбарт хэрэглэгддэг.1Олон дээд ургамал, бичил биетүүд лактазыг ялгаруулдаг.2дейтеромицет, аскомицет, базидиомицет зэрэг мөөгөнцөр нь лактаз үүсгэж чаддаг.3Лакказ (EC 1.10.3.2) нь гурван өөр зэсийн атомаас бүрдсэн системийг ашиглан молекулын хүчилтөрөгчийг ус болгон бууруулж, улмаар янз бүрийн фенолын нэгдлүүд болон үнэрт аминуудыг исэлдүүлдэг цэнхэр оксидаза юм. Жимс, хүнсний ногооны шүүс үйлдвэрлэх явцад ферментийн болон ферментийн бус борлох нь чухал асуудал юм.4Эдгээр бодисууд нь шүүсний өнгө, амт, үнэрт сөргөөр нөлөөлдөг тул тэдгээрийг зайлуулах ёстой.5
Бүх жимснээс алим нь дэлхий даяар болон Европын Холбоонд хамгийн их хэрэглэдэг жимс юм. 2019 онд алимны үйлдвэрлэл 87 сая тонноос давж, дэлхий даяар гуравдугаарт жагссан.6Алим нь флавоноид болон кофейн хүчил, хлорогенийн хүчил зэрэг фенолын хүчил зэрэг олон тооны фенолын нэгдлүүдийг агуулдаг.7Алимны шүүсийг ихэвчлэн тунгалаг хэлбэрээр нь хэрэглэдэг тул шүүх явцад фенолын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн ойролцоогоор 50%-90% нь алдагддаг.8Өнөөдөр хэрэглэгчид полифенолын агууламж өндөртэй булингартай алимны шүүс гэх мэт хамгийн бага боловсруулсан бүтээгдэхүүнийг сонгох хандлагатай байдаг. Гэсэн хэдий ч энэ төрлийн алимны шүүс нь өнгөө алдаж, бараан өнгөтэй болоход онцгой өртөмтгий байдаг.9Алимны шүүсийг бараан өнгөтэй болгохоос сэргийлэх эсвэл багасгахын тулд 60-90°C-д пастеризаци хийх зэрэг дулааны боловсруулалтын аргууд зэрэг янз бүрийн технологиудыг ашигладаг.10Гэсэн хэдий ч Sauceda-Gálvez-ийн хийсэн судалгаагаар11, дулааны боловсруулалт нь дэгдэмхий химийн бодисуудыг устгаж, алимны шүүсний органолептик чанарт нөлөөлж болзошгүй. Дулааны боловсруулалтын аргуудын өөр хувилбаруудад хэт чухал нүүрстөрөгчийн давхар исэл, хэт ягаан туяа, хэт авиан, өндөр гидростатик даралт эсвэл өндөр даралтын нэгэн төрлийн болгох зэрэг орно.12Эдгээр технологийн үр ашиг болон тохиромжтой жимсний шүүсний гарц нь ашигласан параметрүүд болон бүтээгдэхүүний шинж чанараас хамаарна. Тэдгээрийн өргөн хэрэглээ нь өндөр өртөг, зарим хүнсний бүтээгдэхүүний чанарт үзүүлэх сөрөг нөлөө, эсвэл ферментийн идэвхгүйжилт хангалтгүй байгаагаас шалтгаалан хязгаарлагдмал байдаг.13,14
Лакказыг жимсний шүүсийг тогтворжуулж, тунгалаг болгоход ашиглаж болно.15Гөкмен болон бусад.16Жимсний шүүсийг тунгалаг болгоход лакказ хэрэглэхийг зөвлөж байна, учир нь энэ нь фенолын нэгдлүүдийг полимер эсвэл олигомер болгон хувиргаж, аливаа хэт шүүлтүүрийн мембранаар амархан арилдаг тул алимны шүүсийг 50°C-д зургаан долоо хоног хүртэл тогтвортой өнгө, тунгалаг байдлыг хадгалах боломжийг олгодог. Цэвэршүүлсэн *Trichoderma* лакказыг хөнгөнцагааны ислийн бөмбөлөг дээр хөдөлгөөнгүйжүүлж, алимны шүүсний бичил биетний бохирдлоос үүдэлтэй амтгүй нэгдлүүдийг сонгон арилгахад ашигласан.17
Алимны шүүсний ууршимтгай бүрэлдэхүүн хэсгийн ойролцоогоор 80-90% нь эфир ба альдегид бөгөөд эдгээр нь шүүсэнд өвөрмөц үнэр өгдөг.18*Trametes versicolor*-ын лакказыг алимны шүүсийг тунгалаг болгохын тулд залуу кокосын хальснаас гаргаж авсан байгалийн гаралтай эслэгээр хийсэн хямд үнэтэй тулгуур дээр хөдөлгөөнгүй болгосон.19Өмнөх судалгаануудаар алимны шүүсний тогтворжилт (өнгө ба булингаршил)-ийг ферментгүй эсвэл хөдөлгөөнгүй болгох аргыг ашиглан эсвэл хэт шүүлтүүртэй хослуулан судалсан.5,19Гэсэн хэдий ч мөөгөнцрийн лакказ нь алимны шүүсний физик-химийн шинж чанарт хадгалах явцад хэрхэн нөлөөлдөг нь тодорхойгүй хэвээр байна. Тиймээс энэхүү судалгааны зорилго нь мөөгөнцрийн лакказаар боловсруулж, хоёр долоо хоногийн хөргөгчинд хадгалсны дараа алимны шүүсний физик-химийн шинж чанар, фенолын нэгдлийн агууламж, антиоксидант идэвхжилд гарсан өөрчлөлтийг туршилтаар судлах явдал байв. Лакказ нь фенолын нэгдлүүдийг исэлдүүлэх чадвартай тул шүүсний тунгалагжуулалт зэрэг янз бүрийн үйлдвэрлэлийн процесст ашиглахад ирээдүйтэй болгодог. Энэхүү судалгаагаар *Pleurotus ostreatus* NRC 620-ийн лакказыг судалж, тэдгээрийн үйл ажиллагаа, шүүсний тунгалагжуулалтын үр нөлөөний хамгийн тохиромжтой нөхцөлд анхаарлаа хандуулсан. Хясаан мөөг (P. ostreatus NRC 620)-ийн судалгаа хязгаарлагдмал хэвээр байгаа ч өмнөх судалгаанууд Trametes versicolor, Ganoderma lucidum зэрэг янз бүрийн мөөгөнцрийн эх үүсвэрээс гаралтай ферментүүдийг судалж байсан. Энэхүү судалгааны зорилго нь энэхүү ферментийг хүнсний үйлдвэрлэлд ашиглах боломжийг үнэлэх, түүний өвөрмөц шинж чанар, ялангуяа хамгийн тохиромжтой рН ба температурыг тодруулах явдал байв.
2,2′-Азооксибис(3-этилбензотиазолин-6-сульфоны хүчил) (ABTS)-ийг Канадын Сигма-Алдрих компаниас худалдаж авсан. Бусад бүх урвалжууд нь аналитик зэрэглэлийнх байсан.
Үндэсний судалгааны төвийн бичил биетний өсгөвөр цуглуулах төв нь мэдэгдэж буй хясаан мөөгний NRC620 омгийг гаргаж авсан. Дэд өсгөвөрлөсний дараа энэ омгийг төмсний декстрозын агар дээр 4°C температурт хадгалсан. Тариалалтын бэлтгэлийн арга нь дараах байдалтай байв: 10 хоногийн настай, бүрэн хөгжсөн мицелийг төмсний декстрозын агарын тавган дээр тарьж, 28°C температурт өсгөвөрлөв. 10 хоногийн дараа ариутгасан төмөр цоолтуур ашиглан агарын орчиноос 12 мм диаметртэй гурван мицелийн блокыг гаргаж аваад, 50 мл ариутгасан өсгөвөрийн орчин (рН 5.0) агуулсан хөвөн бөглөөтэй 250 мл-ийн Эрленмейер колбонд хийсэн.20). Өсгөврийг 28°C-д 18 хоногийн турш инкубацлав. Дараа нь өсгөврийг Whatman №1 шүүлтүүрийн цаасаар шүүж, үүссэн дээд давхаргыг ферментийн эх үүсвэр болгон ашигласан.
Лактазын идэвхийг ABTS-ийг субстрат болгон ашиглан тодорхойлсон. Урвалын холимог (2 мл) нь 500 мкл 0.3 мМ ABTS (0.1 М натрийн цитратын буферт ууссан, рН 4.5) болон нэрмэл усаар шингэлсэн шаардлагатай хэмжээний ферментийн дээжийг агуулсан.21,22Лакказ нь өрөөний температурт (28 °C ± 2) ABTS-ийг исэлдүүлж чаддаг тул ABTS-ийн исэлдэлтийг 420 нм (ε)-д шингээлтийн өсөлтийг хэмжих замаар тодорхойлсон.420= 36,000 см-1 M -1) Agilent Carry-100 хэт ягаан туяаны спектрофотометр ашиглан. Минутанд 1 μmol ABTS исэлдүүлэхийн тулд лактазын идэвхжилийн нэг нэгж шаардлагатай байсан. Уургийн концентрацийг дотоод хяналт болгон үхрийн сийвэнгийн альбуминыг ашиглан Брэдфордын аргаар тодорхойлсон.23,24
Хясаан мөөгний NRC 620 омгоос ферментийг гарган авсны дараа түүний идэвхийг 28°C-д статик нөхцөлд 25 хоногийн турш өөр өөр тариалалтын интервалаар хэмжсэн.
Температурын лакказын идэвхжилд үзүүлэх нөлөөг судлахын тулд 20-90 °C температурын хүрээнд туршилт явуулсан. Ферментийг нэмж, урвалыг эхлүүлэхийн өмнө буфер (0.1 М натрийн цитрат, рН 4.5) болон субстрат (ABTS)-ийг хольж, янз бүрийн температурт 5 минутын турш инкубацлав. Ферментийн дулааны тогтвортой байдлыг 0.05 М натрийн фосфатын буфер (рН 7.0)-д 40, 50, 60, 70 °C-д тус тус 2 цагийн турш инкубацлах замаар үнэлсэн. Дараа нь үлдэгдэл идэвхжилийг ABTS субстрат ашиглан үнэлсэн.
рН-ийн лакказын идэвхжилд үзүүлэх нөлөөг 2.5-7.0 рН-ийн хязгаартай 0.1 М цитрат-фосфатын буферт ABTS-ийг субстрат болгон ашиглан үнэлсэн. Ферментийн уусмалыг рН-ийн тогтвортой байдлыг үнэлэхийн тулд 0.1 М цитрат ба Трис буферт (рН 3, 4, 6, 7) 40°C-т хоёр цагийн турш инкубацлав. ABTS-ийг субстрат болгон ашигласан үлдэгдэл идэвхийг инкубацийн дараа тооцоолсон.
Лакказыг тус тус 2.5 мМ ба 10 мМ концентрацид янз бүрийн металл ион (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, ба Mn2+) агуулсан натрийн фосфатын буферт (0.05 М, рН 7.0) 10 минут инкубацлав. Дараа нь урвалыг эхлүүлэхийн тулд субстрат (ABTS) нэмж, харьцангуй идэвхийг үнэлсэн.
Кинетик параметрүүдийг (Vmax ба Km) тодорхойлохын тулд янз бүрийн концентрацид (0.025–3 мМ) лакказаар ABTS исэлдэлтийг рН 4.5-д хэмжсэн. КинетиктогтмолуудМихаэлис-Ментений тэгшитгэлийн утгыг урвалын хурдны урвуу утгыг субстратын концентрацийн функц болгон харуулсан Лайнвивер-Буркийн график ашиглан тооцоолсон. Кинетик тогтмолуудыг GraphPad Prism 6.01 хувилбарын програм хангамжийг ашиглан Лайнвивер-Буркийн графикаас тооцоолсон.
Алимыг цоргоны усаар сайтар угаасны дараа тэдгээрийг хоёр хувааж, бүрэн автомат Braun MP80 алимны шүүс шахагч (Германд үйлдвэрлэсэн) ашиглан шүүсийг нь шахаж авсан. Шүүсийг дөрвөн давхар бяслагны даавуугаар шүүсэн. Хяналтын бүлэгт ямар ч фермент нэмээгүй бол шинэхэн бэлтгэсэн алимны шүүсэнд 2.0% лактаз (хамгийн үр дүнтэй концентрацитай) нэмж, 4°C-д хоёр долоо хоног хадгалсан.
Титрлэх хүчиллэг (TA) болон рН-ийг Боултон болон бусад хүмүүсийн аргаар тодорхойлсон.al.27Дээж бүрийн рН-ийг дижитал рН метр (JENWAY 3510 рН метр) ашиглан хэмжсэн. Титрлэх хүчиллэгийг (TA) дараах томъёог ашиглан алимны хүчил дээр үндэслэн тооцоолсон.
энд V ба C нь титрлэхэд ашигласан натрийн гидроксидын уусмалын эзэлхүүн (мл) ба концентраци (0.1 моль/л)-ийг тус тус илэрхийлнэ. K нь алимны хүчлийн хувиргалтын коэффициент бөгөөд 0.067-тай тэнцүү, W нь алимны шүүсний масс (г) юм.
Нийт уусдаг хатуу бодисууд (TDS) бүх жүүсний дээжийн агууламжийг PAL-1 халаасны рефрактометр (ATAGO, Токио, Япон) ашиглан тодорхойлсон. Хэмжилт бүрийн дараа оптик линзийг ионгүйжүүлсэн усаар зайлж, алимны жүүсний дээж бүрийг гурван удаа туршсан. Дээж бүрийн утгыг гурван хэмжилтийн дундажаар тооцоолсон. Алимны жүүсний дээж бүрийн дундаж ± стандарт хазайлтыг мөн эдгээр үр дүнгийн дундажаар тооцоолсон.
Алимны шүүсний дээжийн зуурамтгай чанарыг эргэлтийн вискозиметр (RV, Rheotest 2, Герман) ашиглан үнэлсэн. Дээжийг вискозиметрийн “S2” цилиндр дотор байрлуулсан. Ил харагдах зуурамтгай чанарыг хяргах стресс ба хяргах хурдны муруйн налуугаар илэрхийлсэн бөгөөд үүнийг янз бүрийн хяргах хурдтай үед (1.00-аас 437.4 s⁻¹ хүртэл) хяргах стресс болон харгалзах муруйгаас тооцоолсон. Ил харагдах зуурамтгай чанарыг тооцоолох томъёо нь дараах байдалтай байна.
энд η нь илэрхий зуурамтгай чанар (cP), τ нь зүсэлтийн стресс (dyn/cm²), γ нь зүсэлтийн хурд (sec⁻¹), харин (τ)-г эргүүлэх хүч (α) ба цилиндрийн (Z) утгыг ашиглан дараах томъёог ашиглан тооцоолно: τ = Z . α.
Браунжуулалтын индексийг Мейдав болон бусад хүмүүсийн аргаар тодорхойлсонal.2910 мл-ийн жүүсний дээжийг 2750 xg-д 10 минутын турш центрифугээр түлхсэн. 5 мл жүүсний дээд давхаргыг 5 мл 95% этанолтой хольсон. Холимгийн шингээлтийг 420 нм-т Шимадзу хэт ягаан туяаны спектрофотометр (UV-1601 PC) ашиглан хэмжсэн.
Боултон болон бусад судлаачдын тайлбарласны дагуу нийт фенолын агууламжийг (TPC) Фолин-Чиокалтеу урвалжийг ашиглан колориметрийн аргаар тодорхойлсон.[27]0-ээс 500 мг/л хүртэлх концентрацид галлийн хүчлийн стандарт муруйг байгуулсан (r²= 0.997). Үр дүнг галлийн хүчлийн эквивалент хэлбэрээр илэрхийлнэ (мг GAE/мл).
25 мкл алимны шүүсэнд 125 мкл нэрмэл ус, 2850 мкл FRAP уусмал нэмээд хольцыг харанхуй газар хадгална.30мин. Дараа нь Shimadzu хэт ягаан туяаны спектрофотометр (UV-1601 PC) ашиглан 593 нм-ийн гэрэл шингээлтийг хэмжинэ. FRAP урвалжийг 300 мМ ацетатын буфер (рН 3.6), 20 мМ төмөр(III) хлорид, 10 мМ 2,4,6-трис(2-пиридил)триазин (TPTZ) (40 мМ HCl-д ууссан)-ийг 10:1:1 харьцаатай хольж бэлтгэсэн. Стандарт муруйг Trolox-ийг стандарт болгон ашиглан үүсгэсэн (R²= 0.999) бөгөөд үр дүнг μM Trolox/mL гэж илэрхийлнэ.
Боловсруулсан болон боловсруулаагүй шүүсний антиоксидант идэвхийг DPPH-ийн чөлөөт радикалуудыг гадагшлуулах чадварыг нь үнэлэхийн тулд DPPH аргыг ашиглан тодорхойлсон.31Арван микролитр шүүсийг метанол дахь 1 мл DPPH уусмал (100 μM)-тай хольсон. Харанхуйд 30 минутын турш урвалд орсны дараа хольцын шингээлтийг 517 нм-т Shimadzu хэт ягаан туяаны спектрофотометр (UV-1601 PC) ашиглан хэмжсэн. Үр дүнг тохируулгын муруй дээр үндэслэн тролокс эквивалент (μM тролокс/мл) гэж илэрхийлсэн (R2= 0.990).
Олж авсан мэдээллээс харахад NRC 620 хясааны мөөгний хамгийн их лакказын үйлдвэрлэл исгэх 18 дахь өдрийн эцэс гэхэд ажиглагдаж, 1302 U/L идэвхжилд хүрсэн байна. Энэ нь лакказын үйлдвэрлэлд хамгийн тохиромжтой тариалах хугацааг тодорхойлох үндэс суурь болсон (Зураг 1). Ферментийн үйлдвэрлэл тариалах хугацаа нэмэгдэхийн хэрээр нэмэгдсэн боловч өсөлтийн хурд нь тариалах хугацаатай шууд пропорциональ биш байсан; 21 хоногийн дараа ферментийн идэвхжил ердөө 90 U/L-ээр (1390 U/L хүртэл) нэмэгдсэн. Тиймээс бүтээгдэхүүний гарцыг тариалах хугацааг нэмэгдүүлэх эдийн засгийн ашиг тустай тэнцвэржүүлэхийн тулд эцсийн эцэст 18 өдрийг оновчтой тариалах хугацаа болгон сонгосон.
Pleurotus ostreatus NRC 620-д тариалалтын хугацаа нь лактазын ургацад үзүүлэх нөлөө. Гурван (12 мм) мөөгөнцрийн мицелийн блокыг 50 мл ариутгасан орчинд тарьж, дараа нь 28 °C-д өөр өөр хугацаанд өсгөвөрлөв.
Бусад судалгаануудтай нийцүүлэн бидний үр дүнгээс харахад мөөгөнцрийн оргил үе болох лактазын шүүрлийг бий болгох хамгийн тохиромжтой өсгөврийн хугацаа 7-36 хоногийн хооронд байх магадлалтай.32Эзике болон бусад хүмүүсийн үзэж байгаагаар.33, *Trametes polyzona* WRF03 нь исгэлтийн ес дэх өдрийн эцэс гэхэд хамгийн их хэмжээний лактаз үүсгэсэн бөгөөд 1637 U/мг уургийн тодорхой идэвхжилтэй байв. Цаашилбал, Отман нар.34*Trichoderma harzianum* S7113 нь өсгөвөрлөлтийн тав дахь өдөр их хэмжээний лактаз ялгаруулдаг болохыг тогтоожээ. Лактазын үйлдвэрлэлийн хэмжээ арван дөрөв дэх өдөр оргил идэвхжилдээ хүрч, дараа нь аажмаар буурсан.34Ферментийн шүүрэл нь өсөлтийн гол үе шатанд ч тохиолдож болох боловч завсрын үе шатанд оргил үедээ хүрч, нүүрстөрөгч эсвэл азотын эх үүсвэр хэрэглэснээр өдөөгддөг.34,35
Pleurotus ostreatus NRC 620-ийн лакказ нь 50°C-80°C хүртэлх өргөн температурын хязгаарт өндөр идэвхжил үзүүлж, оргил идэвхжилдээ ойртож (69–98%) байсан ч хамгийн их идэвхжил нь 70°C-д ажиглагдсан (Зураг 2a). Энэ температурын хязгаараас гадуур ферментийн идэвхжил ойролцоогоор 70°C-д буурсан. Эдгээр үр дүнгээс харахад фермент нь өндөр температурт идэвхтэй байдаг бөгөөд энэ нь өндөр температур нь урвалын кинетик энергийг нэмэгдүүлдэгтэй холбоотой байх магадлалтай.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 дахь лакказын идэвхжилд урвалын температур (a) ба рН (b)-ийн нөлөө. Ферментийг нэмж, урвалыг эхлүүлэхийн өмнө хольцыг өөр өөр температурт 5 минутын турш урьдчилан инкубацлах замаар 20-90 °C хүртэлх температурт хүрсэн. 2.5-7.0 рН-ийн хүрээнд 0.1 М цитрат-фосфатын буфер агуулсан уусмалд ABTS-ийг субстрат болгон ашиглан рН-ийн лакказын идэвхжилд үзүүлэх нөлөөг үнэлсэн.
Эзике болон бусад хүмүүсийн үзэж байгаагаарal.33, *Trametes polyzona* WRF03 лакказын хамгийн тохиромжтой температур нь 55 °C бөгөөд энэ нь *Ganoderma lucidum*-ынхтай ижил байна.laccase36мөн *Trametes polyzona* KU-RNW02737-ийн оновчтой температур (50 °C)-тай төстэйлакказ . Балдриан38бусад лигнин задалдаг ферментийн системийн нэгэн адил лакказын хамгийн тохиромжтой температурын хүрээ нь 50-70 °C хооронд байдаг гэж тэмдэглэжээ.
Үр дүнгээс харахад фермент нь рН 3.0-д хамгийн өндөр идэвхжил үзүүлж, рН 3.5-д 94% идэвхжилд хүрсэн байна. Гэсэн хэдий ч энэ нь 2.5-7.0 хоорондох өргөн рН-ийн хүрээнд идэвхтэй хэвээр байсан (Зураг 2b). Цаашилбал, төвийг сахисан эсвэл шүлтлэг орчинтой харьцуулахад хүчиллэг нөхцөлд илүү өндөр идэвхжил үзүүлсэн. Түүний идэвхжил 2.5-4.5 хоорондох рН-ийн хүрээнд дор хаяж 77% хэвээр байсан ч рН 7.0-д ердөө 38% хүрсэн. *Trametes polyzona* WRF03-аас гаргаж авсан лакказын оновчтой рН нь 4.533 байсан бөгөөд энэ нь *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, болон *Trametes hirsuta* 41-ээс гаргаж авсан лакказын рН-тэй ижил байна. Гэсэн хэдий ч Чайрин болон бусад судлаачдын судалгаагаар...42, *Polymorpha f. sp.* WR710-1-ээс гаргаж авсан лакказын оновчтой рН нь 2.2 бол *Polymorpha f. sp.* IBL-04-ээс гаргаж авсан лакказын оновчтой рН нь 5.043 байна. Гидроксидын анионууд (лакказын дарангуйлагч) нь T2/T3 лакказын зэсийн атомуудтай холбогддог нь төвийг сахисан эсвэл шүлтлэг рН-ийн нөхцөлд лакказын идэвхжил буурах шалтгаан болж болзошгүй юм. Энэ нь T1 төвөөс T2/T3 төв рүү дотоод электрон дамжуулалтыг тасалдуулж, улмаархязгаарлахферментийн идэвхжил 23,44
Ферментийг өөр өөр температурт инкубацлах замаар инкубацийн хугацаа болон температур хоёулаа ферментийн тогтвортой байдалд нөлөөлдөг болохыг тогтоожээ. *Trametes polyzona* NRC 620-ийн лактаз нь 40℃ ба 50℃-д илүү өндөр тогтвортой байдлыг үзүүлж, 120 минутын дараа анхны идэвхжилийнхээ 68.33% ба 59.61%-ийг тус тус хадгалсан (Зураг 3a). Үүний эсрэгээр, ижил нөхцөлд (40℃ ба 50℃, 120 минут) *Trametes polyzona* WRF03-ийн лактаз нь идэвхжилийнхээ 64.38% ба 42.92%-ийг тус тус хадгалсан.33Үүний эсрэгээр, инкубацийн хугацаа болон температурыг нэмэгдүүлэх нь *Trametes polyzona* NRC 620 лактазын тогтвортой байдлыг бууруулсан; 60℃ ба 70℃-д 60 минут инкубацийн дараа түүний идэвхжил тус тус 39.24% ба 1.72% болж буурсан (Зураг 3a). Туршилтын үр дүнтэй нийцэж байгаа нь *Trametes polyzona* WRF03-аас гаргаж авсан лактаз нь дулааны боловсруулалтын явцад 40 ба 50℃-д илүү өндөр тогтвортой байдлыг харуулсан.33Үүнтэй адилаар, Луангжароенкит болон бусадal.37болон Чайрин нарal.42Trametes polyzona KURNW027 болон Trametes polyzona WR710-1-ээс гаргаж авсан лакказын тогтвортой байдлыг тус тус 50°C-д 1 цагийн турш мэдээлсэн. Биотехнологийн янз бүрийн салбарт хэрэглэхэд тохиромжтой биокатализаторын хувьд лакказ нь өргөн температурын хүрээнд сайн тогтвортой байдал, гүйцэтгэлтэй байх ёстой.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620-аас гаргаж авсан лакказын термостатик тогтвортой байдал (a) ба рН тогтвортой байдал (b). Термостатик тогтвортой байдлыг ферментийн уусмалыг 0.05 М натрийн фосфатын буферт (рН 7.0) 40, 50, 60, 70 °C-д тус тус 2 цагийн турш инкубацлах замаар үнэлсэн. рН тогтвортой байдлыг ферментийн уусмалыг 0.1 М цитрат буферт болон Трис буферт (рН 3, 4, 6, 7) 40 °C-д 2 цагийн турш инкубацлах замаар үнэлсэн. Үлдэгдэл идэвхийг инкубацийн дараа ABTS-ийг субстрат болгон ашиглан тооцоолсон.
Ферментийн хэрэглээ болон хадгалалтын оновчтой нөхцлийг тодорхойлохын тулд бид рН-ийн лакказын тогтвортой байдалд үзүүлэх нөлөөг судалсан. Өөр өөр рН-ийн утгуудад өртөх нь уургийн бүтцийн тогтвортой байдалд мэдэгдэхүйц нөлөөлж, улмаар ферментийн молекулын тогтвортой байдал, идэвхжилд нөлөөлсөн. Үр дүнгээс харахад фермент нь хүчиллэг нөхцөлд бага тогтвортой байсан бол өндөр рН утгад (төвийг сахисан ба шүлтлэг бүс) илүү сайн тогтвортой байдлыг харуулсан. 7.0, 6.0, 4.0, 3.0 рН утгад 120 минутын дараа ферментийн хадгалалтын түвшин ойролцоогоор 100%, 62.54%, 52.39%, 11.14% тус тус байв (Зураг 3b). *Strombus multisus* WRF03 лакказ нь төвийг сахисан рН утгад (5.5–6.5) илүү тогтвортой, хүчиллэг рН утгад (4.0-ээс доош) бага тогтвортой байдлыг харуулсан. 5.5, 6.0, 6.5 рН-ийн утгад 120 минутын дараа ферментийн хадгалалтын түвшин тус тус ойролцоогоор 82%, 100%, 93% байв.33Хайрин болон бусад.42Trametes polyzona WR710-1-ийн лактаз нь рН-ийн 6.0-7.0 хүрээнд тогтвортой байсан бол Сайед нар ...45лакказ нь төвийг сахисан рН-ийн нөхцөлд илүү тогтвортой болохыг харуулсан. Гэсэн хэдий ч Cerrena unicolor-оос гаргаж авсан лакказ нь шүлтлэг нөхцөлд тогтвортой байдлыг харуулсан (рН 9.0)46Судалгаанд хамрагдсан лакказууд нь өргөн рН-ийн хүрээнд өндөр тогтвортой байдлыг харуулсан. Энэ нь үйлдвэрлэлийн хэрэглээнд чухал шинж чанар байж болох юм.
Зарим металлын ионууд нь ферментийн идэвхжилд өдөөгч болон дарангуйлах нөлөө үзүүлдэг тул тэдгээрийн ферментийн идэвхжилд үзүүлэх нөлөөг үйлдвэрлэлийн хэрэглээнд авч үзэх шаардлагатай. Энэ нь маш чухал юм, учир нь металлын ионууд нь эсийн гаднах ферментийн тогтвортой байдал, нийлэгжилтэд нөлөөлж болох нийтлэг хүрээлэн буй орчны бохирдуулагч юм.47*Pleurotus ostreatus* NRC 620-ийн лакказад олон металлын ионуудын нөлөөллийг судлахын тулд бид харгалзах туршилтуудыг хийсэн. Зураг 4-т үзүүлсэнчлэн, ашигласан металлын төрлөөс хамааран металлын ионы концентрацийг 2.5 мМ-ээс 10 мМ хүртэл нэмэгдүүлэх нь ферментийн үйл ажиллагаанд сөргөөр нөлөөлсөн. Жишээлбэл,Мг²⁺ , Ко²⁺ , Zn²⁺, баCu²⁺ферментийн идэвхийг өдөөж, идэвхжүүлж болно, харинНа⁺ , Mn²⁺ , Ca²⁺, баK⁺ферментийн идэвхийг дарангуйлж болзошгүй. 10 мМ концентрацид Cu²⁺ ба Mg²⁺ ионууд нь *Pleurotus ostreatus* NRC 620-аас гаргаж авсан лакказын идэвхийг хамгийн хүчтэй идэвхжүүлэгчид байсан бөгөөд тус тус ойролцоогоор 34% ба 20% -ийн идэвхжилийн түвшинг хангаж байв. Гэсэн хэдий ч 10 мМ концентрацид Ca²⁺ ионууд нь лакказын хамгийн хүчтэй дарангуйлагч байсан бөгөөд ферментийн идэвхийг ойролцоогоор 60% -иар бууруулсан.
Металл ионуудын Pleurotus ostreatus NRC 620 лактазын идэвхжилд үзүүлэх нөлөө. Лактазыг 2.5 мМ ба 10 мМ концентрацитай янз бүрийн металл ион агуулсан натрийн фосфатын буфер (0.05 М, рН 7.0)-д 10 минут инкубацлав. Дараа нь субстрат (ABTS) нэмж урвалыг эхлүүлсний дараа харьцангуй идэвхжилийг хэмжив.
Бидний үр дүн нь Mg²⁺ болон Cu²⁺ нь *Trametes polyzona* WRF03³-ийн идэвхийг нэмэгдүүлдэг болохыг тогтоосон бусад зохиогчдын үр дүнтэй нийцэж байна. Кастано нар.⁴⁸ *Xylaria* sp.-ийн лактаз нь зэсийн ионууд (Cu²⁺)-аар тодорхой хэмжээгээр өдөөгддөг болохыг тогтоожээ. Цаашилбал, Foroutanfar нар.⁴⁹ болон Si нар.⁵⁰ нар тус тус *Paraconiothyrium variabile* болон *Trametes pubescens*-ийн лактазууд дээр ижил төстэй судалгаа хийсэн. Энэ ферментийн II төрлийн зэс холбох цэг (T2) нь өгөгдсөн концентрацид Cu²⁺-ээр ханасан байж болох бөгөөд энэ нь Cu²⁺³⁹-ийн өндөр концентрацид лактазын идэвхжил өдөөгддөг болохыг тайлбарлаж болох юм. Цагаан ялзрах мөөгөнцрийн лактаза нь олон зэсийн атом агуулсан оксидаза тул зэсийн ионуудын лактазын идэвхжилд үзүүлэх нөлөө нь олон янз бөгөөд өдөөгч ба дарангуйлагчаас төвийг сахисан хүртэл хэлбэлздэг.⁵¹ Үүний эсрэгээр, Жоу нар. [52]гэж мэдээлсэнCu²⁺Тайванийн газар доорх термит (Odontotermes formosanus)-ийн лактазын идэвхийг дарангуйлсан. Гэсэн хэдий ч Cerena sp. HYB07-ийн лактазууд[53]болон Clitocybe maxima[54]зэсийн ионууд нөлөөлөөгүй.
Субстратын өвөрмөц чанарыг түүний кинетик параметрүүдээр (Km ба Vmax) илэрхийлсэн; субстратын ферменттэй холбогдох хамаарал өндөр байх тусам Km утга бага, субстратын өвөрмөц чанар өндөр байна.3,21,55*Pleurotus ostreatus* NRC 620-аас гаргаж авсан лакказын кинетик параметрүүдийг (Km ба Vmax) GraphPad Prism 6.0 програм хангамж ашиглан Lineweaver-Burk графикийг зурж тодорхойлсон (Зураг 5). ABTS-ийг субстрат болгон ашиглахад үр дүн нь 1.99 мМ ба 16217 μмоль байв.мин⁻¹ L⁻¹,тус тус. Элсайед нар.21ABTS исэлдэлтийн Km утга нь тус тус 0.1 мМ ба 0.064 мМ байсан нь Lac A ба Lac B изоэнзимүүдийн ABTS-д өндөр хамааралтай болохыг харуулж байна гэж мэдээлсэн. Цаашилбал, Vmax утга нь 0.182 μмоль байв.мин⁻¹ба 0.603 мкмольмин⁻¹тус тус. Олж авсан Km утга нь Trametes polyzona WRF03-ийнхээс (8.66 мМ) бага байсан; цаашлаад тэдгээрийн Vmax утга (1429 ммоль мин⁻¹) мөн байсандоодABTS-ийг субстрат болгон ашиглах үед.33 Үүнтэй адилаар, Lentinus squarrosulus MR13 болон Trametes sp. AH28-2 лактазын агууламжийн Km утга нь тус тус 0.0714 мМ ба 0.025 мМ байсан бөгөөд Vmax утга нь 0.0091 мМ мин−1 ба 0.67 мМ мин−1 мг−1 байв (ABTS-тэй харьцуулахад)тус тус .56,57
*Pleurotus ostreatus* NRC 620-аас гаргаж авсан лакказын идэвхжилд ABTS-ийн концентрацийн нөлөөллийг судалж, анхны урвалын хурд ба ABTS-ийн концентрацийн урвуу утгын Lineweaver-Burk графикийг зурсан. Кинетик параметрүүдийг (Vmax ба Km) тодорхойлохын тулд лакказын өөр өөр концентрацитай (0.025–3.0 мМ) ABTS-ийн исэлдэлтийн урвалыг рН 4.5-д хэмжсэн. Михаэлис-Ментенийн кинетик тогтмолуудыг урвалын хурд ба субстратын концентрацийн урвуу утгын Lineweaver-Burk графикийг ашиглан тооцоолсон. Кинетик тогтмолуудыг GraphPad Prism 6.01 програм хангамжийг ашиглан Lineweaver-Burk графикаас тооцоолсон.
Пектиназа зэрэг уламжлалт тунгалагжуулагч ферментүүд нь пектик бодисыг гидролизжүүлж, зуурамтгай чанар болон булингарыг бууруулдаг. Эдгээр нь бүтцийн полисахаридыг үр дүнтэй задалдаг бөгөөд ихэвчлэн целлюлаза, гемицеллюлаза зэрэг бусад ферментүүдтэй хамт гарц болон тунгалаг байдлыг сайжруулахад ашигладаг. Гэсэн хэдий ч пектиназа нь фенолын нэгдлүүдийг тусгайлан чиглүүлдэггүй бөгөөд эдгээр нь булингаршил болон исэлдэлтийн боржилтод гол хувь нэмэр оруулдаг, ялангуяа алим, усан үзмийн шүүс зэрэг шүүсэнд нөлөөлдөг.58Үүний эсрэгээр, лактаз нь фенолын нэгдлүүдийн исэлдэлтийг хурдасгаж, тэдгээрийг тунадасжуулалт эсвэл шүүх замаар зайлуулж болох том, уусдаггүй молекулууд болгон полимержүүлдэг. Энэ механизм нь зөвхөн тунгалаг байдлыг сайжруулаад зогсохгүй фенолын нэгдлүүдээс үүдэлтэй исэлдэлтийн борлох магадлалыг бууруулснаар шүүсний хадгалах хугацааг уртасгадаг. Цаашилбал, лактаз дээр суурилсан тунгалагжуулах процессыг зөөлөн боловсруулалтын нөхцөлд (рН 3.5–5.5, температур 25–40 °C) хийж болох бөгөөд энэ нь тэдгээрийг тэжээллэг чанар болон органолептик шинж чанарт нь хор хөнөөл учруулахгүйгээр нарийн шүүсэнд тохиромжтой болгодог.59Судалгаагаар пектиназын эмчилгээ нь шүүсийг 1-2 цагийн дотор тунгалагжуулж чаддаг болохыг харуулсан бол лакказын эмчилгээ нь фенолын нэгдлүүдийг бүрэн багасгахын тулд ихэвчлэн илүү урт урвалын хугацаа (3-6 цаг) шаарддаг. Гэсэн хэдий ч энэ процессыг ферментийг хөдөлгөөнгүй болгох эсвэл лакказыг механик тунгалагжуулах аргуудтай хослуулан оновчтой болгож болно.60Энэхүү судалгаагаар түүхий хандын ферментийн профайлыг судлахад лакказа болон α-амилазын идэвхжил мэдэгдэхүйц байсан бол пектиназа болон ксиланазын идэвхжил маш бага байсан бөгөөд целлюлазын идэвхжил илрээгүй. Тиймээс булингар болон фенолын агууламж буурсан нь голчлон лакказын үйлчлэлтэй холбоотой байсан бол зуурамтгай чанарын өөрчлөлт нь амилазын үйлчлэлтэй холбоотой байж болох юм.
Хүснэгт 1-т шинэхэн шахсан алимны шүүс болон лакказаар боловсруулсан дээжийн физик-химийн үзүүлэлтүүдийг харуулав. Үр дүнгээс харахад шинэхэн шахсан алимны шүүсний гарц (71.59%) нь лакказаар боловсруулсан дээжийнхээс (87.34%) бага байв. Эдгээр үр дүн нь Пилник болон Оранжийн судалгааны үр дүнтэй нийцэж байна.61, жимс боловсруулахад ферментийг ашиглах нь шүүсний гарцыг нэмэгдүүлж, шүүлтүүрийг сайжруулж, өндөр чанартай, тунгалаг шүүс гаргаж авах боломжтойг хэн онцолсон. Шүүсний гарц нэмэгдэх нь голчлон шүүсэнд уусдаг сахарын агууламж нэмэгдсэнтэй холбоотой юм. Жимсний ферментийн гидролизийн үед бүтээгдэхүүний эсийн хананд мезоглеа болон пектин задарч, төвийг сахисан сахар, хүчил зэрэг уусдаг бодис болж хувирдаг.62.Ферментээр боловсруулсан алимны шүүсний рН-ийн утга нь хяналтын бүлгийнхээс мэдэгдэхүйц бага байсан (P < 0.05) бөгөөд хадгалах явцад хоёр бүлгийн рН-ийн утга мэдэгдэхүйц нэмэгдсэн (Хүснэгт 1). Эдгээр үр дүн нь Марк болон бусад хүмүүсийн үр дүнтэй нийцэж байна.63, кешью жимсний шүүсний рН нь дулааны боловсруулалтын дараа хадгалалтын дараа буурсан болохыг тэмдэглэсэн. Ферментийн боловсруулалтын дараа пектиний задрал болон галактуроны хүчил үүсэх нь хадгалах явцад рН-ийн өсөлтөд нөлөөлж болзошгүй юм. Ферментээр боловсруулсан дээжийн рН нь хадгалалтын туршид 4.05-4.31 хооронд байсан бол боловсруулаагүй алимны шүүсний рН нь 4.12-4.33 хооронд хэлбэлзэж байв.
Боловсруулаагүй болон лакказаар боловсруулсан дээжийн нийт хүчиллэг (TA) нь хадгалах хугацаа нэмэгдэхийн хэрээр буурах хандлагатай байв (Хүснэгт 1). Хүчиллэг буурсан нь органик хүчлийг нүүрс ус болгон хувиргах эсвэл ферментийн урвал, мөн шүүс хадгалах явцад исэлдсэнтэй холбоотой байв.64Хяналтын алимны шүүс болон ферментээр боловсруулсан дээжийн нийт хүчиллэг чанар нь бусад шүүснээс бага байсан (гүзээлзгэний шүүс 0.9%, чавганы шүүс 2.2%, кумкват шүүс 1.0%, чангаанзны шүүс 2.4%, жүржийн шүүс 0.8%), гэхдээ бусад шүүстэй төстэй (жишээлбэл, лийрийн шүүс 0.3%).62Боловсруулаагүй шинэхэн шахсан алимны шүүсний эдгээр ялгаа нь ургалтын нөхцөл, генетикийн хүчин зүйл, боловсорч гүйцэх түвшин, боловсруулалтын арга зэрэг янз бүрийн хүчин зүйлээс шалтгаалж болно.65Хяналтын болон лакказаар боловсруулсан алимны шүүсний нийт хүчиллэг бууралт нь Сингх болон бусад судлаачдын танилцуулсан үр дүнтэй нийцэж байна.66Жин Нуо алимны шүүсний нийт хүчиллэг чанар 74 хоног хадгалсны дараа буурсантай холбоотой. Нөгөөтэйгүүр, Ошмянский болон Войдило67уламжлалт тодруулах аргуудын үр нөлөөг судлахад алимны шүүсний хүчиллэг байдалд мэдэгдэхүйц өөрчлөлт гараагүй.
Хүснэгт 1-д үзүүлсэн үр дүнгээс харахад лактазаар боловсруулсан алимны шүүсний нийт уусдаг хатуу бодисын (TSS) утга нь боловсруулаагүй дээжийнхээс өндөр байсан. Эдгээр үр дүн нь нийтлэгдсэн судалгаатай нийцэж байна.68Цаашилбал, Хүснэгт 1-ээс харахад хяналтын алимны шүүсний бүлгийн TSS утга нь анхны үед 9.58 байсан бөгөөд хадгалах хугацаа дуусахад 11.05 хүрсэн байна. Эдгээр утга нь Хамид болон бусад хүмүүсийн мэдээлсэн шинэхэн алимны шүүсний TSS утгаас бага байна.69(тус тус 11.2 ба 11.80). Лаккозоор боловсруулсан алимны шүүсний дээжийн TSS утга нь мэдэгдэхүйц нэмэгдэж, 11.23-аас эхлэн 4°C-д хоёр долоо хоногийн турш хадгалсны дараа 12.93 болсон (Хүснэгт 1). Хадгалах явцад TSS-ийн ижил төстэй өсөлт цитрус жимс, нимбэг, амтат жүржид ажиглагдсан. Хадгалах явцад нийт уусдаг хатуу бодисын (TSS) өсөлт нь полисахарид (цардуул) моносахарид (элсэн чихэр) болж гидролизжих, шүүсний шингэн алдалтын улмаас концентраци нэмэгдэх, шүүсэн дэх пектин уусдаг хатуу бодис болж задрахтай холбоотой байж болох юм. Нийт уусдаг хатуу бодисын (TSS) өсөлт нь уусдаг сахарын хэмжээ ихэссэнтэй холбоотой байж болох бөгөөд энэ нь пектин эсвэл целлюлазагаар тус тус уусдаг сахар болгон хувиргах, эсвэл цардуулыг элсэн чихэр болгон гидролизлох замаар Хамед нарын мэдээлснээр үүсч болно.69.Лакказын алимны шүүсний шинж чанарт үзүүлэх нөлөөг нүдээр ажиглаж болно, учир нь лакказаар боловсруулсан алимны шүүс нь боловсруулаагүй шүүснээс илүү сайн урсах чадвартай, бага зуурамтгай чанартай байдаг. Энэхүү ажиглалтыг Хүснэгт 1-т тэмдэглэсэн болно; Ферментээр боловсруулсан дээжийн зуурамтгай чанар нь 1.87 cP байсан бол хяналтын дээжийн зуурамтгай чанар нь 2.95 cP байв. Зуурамтгай чанарын энэхүү мэдэгдэхүйц бууралт нь пектин төст бодисын ус хадгалах чадвар өндөр, нэгдмэл сүлжээний бүтэц үүссэнтэй холбоотой байх магадлалтай.
Энэхүү судалгаанд алимны шүүсний борлох индекс (BI)-д лакказын нөлөөг спектрофотометр ашиглан 420 нм-ийн шингээлтийг хэмжих замаар судалсан. Үр дүнг Хүснэгт 1-д үзүүлэв. Хадгалах явцад боловсруулсан болон боловсруулаагүй бүлгийн алимны шүүсний дээжийн BI нь аажмаар нэмэгдэх хандлагатай байв. BI нь борлох түвшинг тусгадаг бөгөөд ... үүрэг гүйцэтгэж болно.чухалферментийн болон ферментийн бус борлох урвалын индикатор. Хадгалах явцад шингээлт мэдэгдэхүйц нэмэгдсэн (P < 0.05). Хадгалах хугацаа дуусахадА420Хяналтын болон ферментээр боловсруулсан бүлгүүдийн алимны шүүсний дээжийн үнэ цэнэ тус тус 217% ба 121%-иар өссөн (Хүснэгт 1). Үр дүнгээс харахад ферментээр эмчлэх нь борлох түвшинг 56% орчим бууруулж чадна. Безерра болон бусад судалгааны үр дүн.[19]] нь бидний үр дүнтэй нийцэж байна; Тэд алимны шүүсийг тунгалаг болгохын тулд лактаз-глутаральдегид-кокосын эслэгийг ашигласан бөгөөд энэ нь түүний анхны өнгийг 61%-иар бууруулсан.
Жимсний шүүсэнд агуулагдах полифенолууд нь хүний биед эерэг тэжээллэг, эмчилгээний нөлөө үзүүлдэг боловч уурагтай урвалд орж, шүүсний булингар, тунадасжилт эсвэл булингаршил үүсгэж, улмаар бүтээгдэхүүний амт, үнэрийг өөрчилж, хадгалах хугацааг богиносгодог.71Энэхүү судалгааны зорилго нь Pleurotus ostreatus NRC 620-ийн лакказыг ашиглан алимны шүүсний фенолын нэгдлийн агууламжийг аюулгүйгээр бууруулах явдал байв. Хүснэгт 1-д үзүүлсэн үр дүнгээс харахад лакказаар боловсруулсан алимны шүүсний нийт фенолын нэгдлийн агууламж 4°C-д хадгалахаас өмнө мэдэгдэхүйц буурсан байна. Цаашилбал, судалгаанд хамрагдсан хоёр дээжинд хадгалах явцад нийт фенолын нэгдлийн агууламж буурсан байна (Хүснэгт 1). Сандри болон бусад судлаачдын судалгаа.72ферментээр боловсруулсан алимны шүүс нь антиоксидант идэвхжил болон фенолын нэгдлийн агууламжаа хадгалж чаддаг болохыг харуулсан. Гэсэн хэдий ч Леттера болон бусад судлаачдын хийсэн судалгааны үр дүн.73жүржийн шүүсийг мөөгөнцрийн лактазаар эмчлэх нь түүнд агуулагдах фенолын нэгдлүүдийн агууламжийг 45% хүртэл бууруулж болохыг харуулсан.
Фенолын нэгдлүүд нь чөлөөт радикалуудыг саармагжуулах, хүчилтөрөгчийг синглет хэлбэрээр бууруулах, унтраах, устөрөгчийн атомыг шилжүүлэх, чөлөөт радикалуудад электрон хандивлах зэрэг шинж чанартай тул тэдгээрийг хүчтэй антиоксидант болгодог нь батлагдсан.74Тиймээс энэхүү судалгаанд хөргөгчинд 14 хоног хадгалсан алимны шүүсний антиоксидант идэвхжилд лакказын нөлөөг үнэлэхэд DPPH болон FRAP дээр суурилсан аргуудыг ашигласан (Хүснэгт 2). Хоёр арга хоёулаа хадгалах явцад антиоксидант идэвхжил нэмэгдсэн нь чөлөөт фенолын нэгдлүүдийн хэмжээ ихэссэн эсвэл Майллард урвалын бүтээгдэхүүн (MRP) үүссэнтэй холбоотой байж болох бөгөөд Майллард урвалын бүтээгдэхүүн нь антиоксидант идэвхжил нэмэгдэх шалтгаан болсон байх магадлалтай.75Ферментийн бус борлох урвалууд (аскорбины хүчлийн задрал, Майллард урвал, элсэн чихрийн хүчилээр катализжуулсан задрал орно) нь бор пигмент (меланоидин) үүсгэдэг. Аскорбины хүчлийн задралын завсрын бүтээгдэхүүн болон элсэн чихрийн задралын бүтээгдэхүүн (карбонилын нэгдлүүд гэх мэт) нь Майллард урвалаар дамжуулан амин хүчлүүдтэй урвалд орж болно.76Жимс, хүнсний ногоог хадгалах явцад борлох талаар өргөн хүрээтэй судалгаа хийгдсэн боловч эдгээр урвалын талаарх бидний ойлголт хязгаарлагдмал хэвээр байна.77FRAP аргатай харьцуулахад лакказаар боловсруулсан алимны шүүс нь DPPH аргаар антиоксидант идэвхжил мэдэгдэхүйц бага байгааг харуулсан (Хүснэгт 2) бөгөөд бүх дээжийн антиоксидант идэвхжил нь хадгалах хугацаа нэмэгдэхийн хэрээр мэдэгдэхүйц нэмэгдсэн. Энэхүү судалгаанд антиоксидант идэвхжилийг тодорхойлох хоёр өөр аргыг ашигласан, учир нь тэдгээрийн зарчим өөр өөр байдаг. DPPH арга нь чөлөөт радикалуудыг саармагжуулах чадварыг хэмждэг бол FRAP арга нь төмрийн ионуудыг бууруулах чадварыг хэмждэг. Тиймээс судлагдсан дээжийн антиоксидант идэвхжилийг илүү сайн ойлгохын тулд антиоксидант идэвхжилийг тодорхойлох олон аргыг ашиглахыг зөвлөж байна.78
Энэхүү судалгааны гол олдворуудын нэг нь *Pleurotus ostreatus* лакказ NRC 620 нь 70°C ба рН 3.0-д оновчтой идэвхжил үзүүлдэг явдал юм. *Trametes versicolor* болон *Ganoderma lucidum* лакказ зэрэг шүүсийг тунгалаг болгоход түгээмэл хэрэглэгддэг бусад мөөгөнцрийн лакказуудтай харьцуулахад *P. ostreatus* NRC 620 нь илүү өндөр дулааны тогтвортой байдал, илүү хүчиллэг рН-ийг үзүүлдэг. *Trametes versicolor* болон *Ganoderma lucidum*-оос гаргаж авсан лакказууд нь ихэвчлэн 50-60°C-ийн хооронд, рН-ийн утга 3.5-5.0 хооронд байх үед оновчтой идэвхжил үзүүлдэг. Энэ ялгаа нь шүүсийг тунгалаг болгох үр ашгийг сайжруулахад хувь нэмэр оруулж болох бөгөөд ялангуяа рН-ийн утга багатай үед тогтвортой байдал чухал байдаг хүчиллэг шүүсний хувьд. *P.-ийн өвөрмөц шинж чанар. Бусад судлагдсан мөөгөнцрийн лакказуудтай харьцуулахад *Pleurotus ostreatus* NRC 620 нь илүү хүнд нөхцөлд үр дүнтэй ажиллах чадвартай. Түүний оновчтой идэвхжилийн өндөр температур нь үйлдвэрлэлийн хэрэглээнд илүү хурдан урвалын хурд, бичил биетний бохирдлыг бууруулах зэрэг давуу талуудыг харуулж байна. Олон шүүсний хүчиллэг шинж чанарт сайн тохирсон бага рН нь шүүсийг тунгаах процесст ашигтай байж болох юм. Эдгээр үр дүнгүүд нь *Pleurotus ostreatus* NRC 620-ийг уламжлалт мөөгөнцрийн лактазын эх үүсвэрийн боломжит хувилбар болгож, өргөн хүрээтэй хэрэглээг цаашид судлах үндэслэл болж байна. Өмнөх судалгаануудтай харьцуулахад бид оновчтой температур нь 60°C, оновчтой рН нь 3.0 болохыг тогтоосон. 60°C-д 80 минутын турш урвалд орсны дараа *Ganoderma lucidum* лактаз хадгалагдана.46түүний үйл ажиллагааны %.79 Курниавати болон Ницеллийн хэлснээр80, *Ganoderma lucidum* ферментүүд нь 25°C ба рН-ийн утга 5.0-8.0 хооронд, рН 6.0 ба 10-30°C хооронд хэлбэлздэг температурт маш сайн эсвэл дунд зэргийн тогтвортой байдлыг харуулдаг. Энэхүү судалгаагаар бид *Pleurotus ostreatus*-ын ферментийн идэвхжилийн оновчтой рН ба температур нь тус тус 3.0 ба 70°C болохыг тогтоосон. 40°C ба 50°C-д хоёр цагийн турш инкубацийн дараа фермент нь идэвхжилийнхээ 68.33% ба 59.61%-ийг тус тус хадгалсан. Цаашилбал, Pleurotus ostreatus NRC 620 лакказ нь 50°C-аас 80°C хүртэлх өргөн температурын хязгаарт өндөр идэвхжил үзүүлж, бараг хамгийн их идэвхжилд (69%-98%) хүрсэн бөгөөд хамгийн их идэвхжил 70°C-д ажиглагдсан.
Эцэст нь хэлэхэд, статик нөхцөлд гаргаж авсан хясааны мөөгний лактаз NRC620 нь рН болон температурын янз бүрийн нөхцөлд оновчтой идэвхжил, тогтвортой байдлыг харуулсан бөгөөд бусад ферментийн эх үүсвэрүүдтэй харьцуулахад илүү сайн тогтвортой байдлыг харуулсан. 10 мМ MgSO₄ болон CuSO₄ нэмэхэд ферментийн идэвхжил ойролцоогоор 21% ба 35%-иар тус тус нэмэгдсэн. Алимны шүүс болгон боловсруулахад фермент нь рН болон зуурамтгай чанарыг бууруулсан бол фенолын агууламж хадгалах явцад бага зэрэг буурсан.
Үр дүн нь хүнсний үйлдвэрлэл, ялангуяа ундааны тунгалагжуулагчийн салбарт лакказын боломжийг баталж байна. Фенолын нэгдлүүдийг тусгайлан задалснаар лакказ нь булингарыг бууруулж, тунгалаг байдлыг сайжруулаад зогсохгүй зөөлөн ажиллагааны нөхцөлд жимсний шүүсний чанарыг хадгалдаг. Желатин, бентонит, цахиурын гель зэрэг уламжлалт тунгалагжуулагч бодисуудаас ялгаатай нь лакказ нь хаягдал үүсгэдэггүй эсвэл ундаанаас тааламжтай үнэрийг арилгадаггүй тул байгаль орчинд ээлтэй, тогтвортой сонголт болдог. Цаашилбал, бусад фермент болон шүүлтүүрийн аргуудтай харьцуулахад лакказ нь бүтээгдэхүүний чанарыг алдагдуулахгүйгээр чиглэсэн, зардал багатай шийдлийг санал болгодог.
Кёомухимбо, ХД болон Бринк, ХГ. Зэс агуулсан лакказын хэрэглээ ба хөдөлгөөнгүй болгох стратеги; тойм. Хелион 9, e13156 (2023).
Нийтэлсэн цаг: 2025 оны 12-р сарын 15